直接检测-----无需样本预稀释!
本产品仅供科研使用 。
用于定量测定人DKK-1水平的酶联免疫测定
，影响成骨细胞成熟的WNT信号通道的拮抗剂
【应用领域】
l WNT信号
l 骨关节炎
l 骨质疏松症
l 结肠癌
l 骨转移(乳腺癌)
l 多发性骨髓瘤
【试剂盒特征】
方法学
： 三明治夹心法（酶联免疫法）
样本类型
：血清
样本量
： 20 μl /每个样本
检测范围
： 0-160 pmol/l
检测限
： 1.7 pmol/l
孵育时间
： 2 h / 1 h / 30 min
单位换算
： 1 pg/ml = 0.039 pmol/l (MW: 25.8 kDa)
【背景知识】
• 人DKK-1 由266 个氨基酸组成 ，其相对分子质量在29 k 左右 ，而糖基化形式的DKK-1 在Western blot 检测显示位于35 k 位置 ，Tulac 等[2]报道Western blot 有时可检测到DKK-1 不同的糖基化水平的条带 。
• 对DKKs功能域和DKKs嵌合体的研究显示 ，Wnt8 抑制需要DKK-1 和DKK-2的C 端与LRP6 的相互作用 ，而DKK-1 的N端部分能够对DKK-1 和LRP5/6 的相互作用起抑制作用[3] 。
• DKK-1 是Wnt 通路的抑制分子 。分泌蛋白Wnt结合细胞表面受体Frizzled ，通过b-catenin 的降解复合体解散阻断b-catenin的降解途径 ，促使b-catenin进入胞核 ，与T 细胞因子结合，启动多种靶基因表达(有细胞特异性) ，其中的c-myc 、cyclin D 、Akt等与细胞周期的调控和癌症的发展密切相关 。
• 除此之外 ，Wnt 发生作用还需要另一个受体LRP5/6, 而DKK-1 能与LRP5/6 、Kremen 1/2 形成三聚体 ，通过诱导快速的细胞内吞减少细胞膜上的LRP5/6 ，以此阻断Wnt 信号向胞内传递 。
• 然而
，Semenov 等[4]也证明DKK-1 拮抗Wnt 通路不需要通过LRP6 的内吞
，这个结论与Yamamoto 等[5]的发现相反
。
【Dkk-1 表达的调控】
• Dkk-1 可被多种调控分子调节
，如p53
、二羟维生素D3(1a, 25-dihydroxyvitamin D3)
、MSX(Mshhomeobox 1)
、黄体酮
、b-catenin/TCF
、c-myc 等
。Dkk-1 的表达受p53 的调控
，而p53 是一个研究很深入的抑癌基因
。
• 研究发现
，在Dkk-1 转录起始位点上游2 100 bp 处有p53 应答元件。此外
，只有在有野生型p53 作用下
，DNA损伤才能使Dkk-1 上调
，DKK-1 通过拮抗Wnt 通路信号介导p53 的抑癌作用[6]
。但通过在神经胶质瘤中的突变检测
，发现DKK-1 主要通过不依赖p53 的途径发挥作用
。在对神经母细胞瘤的研究中发现MYCN抑制Dkk-1 的表达
，这显示Dkk-1 可能也是癌基因MYCN起作用的途径之一
，但MYCN 不结合于Dkk-1 的启动子附近
，可能通过间接途径下调Dkk-1 的表达[7]
。
• Dkk-1也是b-catenin 调控的靶基因之一
，在其启动子区域有多个b-catenin/TCF 结合位点
，还发现引导非经典Wnt 通路的Wnt5a 不激活Dkk-1
，而引导经典Wnt通路的Wnt1 或者异位表达的b-catenin
、TCF 或者LRP6 突变体可以诱导人Dkk-1 基因的转录[8]
，这显示在Dkk-1 和b-catenin 之间存在一个负反馈作用
。
• 同样可以上调Dkk-1 表达的二羟维生素D3
，因为被发现具有抗增殖和抑制肝细胞癌发生的作用
，成为一种肿瘤治疗的候选物[9]
。
• 黄体酮在子宫内膜基质细胞中被发现能够在mRNA和蛋白质水平诱导Dkk-1表达
，并能在子宫内膜癌细胞中抑制Wnt 通路的激活[2,10]
。
• 另外
，还有研究发现烟草烟雾抑制肺癌细胞内Dkk-1 的表达[11]
。
• 在神经母细胞瘤中
，Revet 等[12]报道
，MSX1 在没有阻断Wnt3a
、Wnt5a信号的情况下
，上调DKK-1
。这个结果提示Dkk-1可能和其他Wnt通路以外的某个未知信号通路有关.
【Dkk-1在各种肿瘤中的表达】
• Dkk-1 在多种肿瘤中因被表观遗传修饰而表达下调
，如人结直肠癌
、胃肠道癌[13]
、子宫颈癌[14]
、成神经管细胞瘤[15]
、乳腺癌[16]和白血病[17]等
。另外
，表观遗传修饰导致的Dkk-1 抑制也在进行性的肺腺癌中被发现[18]
。然而
，另一方面
，在其他许多肿瘤中
，Dkk-1显示出异常高水平的表达
。
• Dkk-1 首先在人肝母细胞瘤和Wilms’瘤中[19]
，然后在肝肿瘤中[20]被发现高表达
。Dkk-1 的高表达被证明可以成为多种肿瘤预后差的标志
，如肝细胞癌[21]
、食道癌[22-25]
、骨肉瘤[26]
、肺癌[23,27,28]、卵巢上皮癌[29]和多发性骨髓瘤[30-32]。
• 另外
，Forget 等[33]研究发现乳腺癌细胞也分泌DKK-1
，
• 尤其易于在雌二醇受体
、黄体酮受体阴性的肿瘤
，
• 以及在有乳腺癌家族史女性的肿瘤中分泌。
【Dkk-1在肝癌细胞中的研究进展】
• Dk k-1 被发现在肝母细胞瘤
、肝癌中表达上调
。
• 余艳军等[34]在一项对肝癌组织中Dkk-1 表达情况的检测发现
，Dkk-1 在检测的大部分肝癌组织中有高表达
，表现为肝癌中的表达水平高于癌旁组织
；另一个研究则显示在肝癌中b-catenin 过表达
，这显示Dkk-1 的高表达可能是Wnt 通路异常激活的结果
。
• 如上所述
，Dkk-1 基因受b-catenin 激活转录
，说明某些癌症中Dkk-1 表达的下调是由于这个Wnt 通路负反馈机制的缺失
。
• 但是Dkk-1 也有在肿瘤中表达上调的例子
，如81%的肝母细胞瘤有Dkk-1的表达
，而正常的没有一个有Dkk-1 的表达
；45%的肝母细胞瘤中有b-catenin 激活性突变
，85%中有b-catenin 的积累
。
• 然而
，在对HCC 中DKK-1 的作用的一系列研究中
，得出了不同的结论
，如Qin 等[35]对高转移的HCC细胞系H7402 的研究表明
，DKK-1表现为一个增殖和侵袭抑制物
；但是
，Yu 等[21]研究表明DKK-1 促进肝癌细胞的转移
。
【DKK-1在肿瘤中的功能研究】
• 多数研究结果表明 ，DKK-1 抑制增殖和侵袭 ，诱导凋亡 。DKK-1 抑制神经母细胞瘤细胞[7] ，但促进乳腺癌[36,37]和头颈癌细胞的增殖[38] ，抑制子宫内膜癌的侵袭[39] ，激活黑色素瘤细胞的凋亡[40] 。
• DKK-1的过表达与肿瘤的转移 ，尤其是骨转移相关的肿瘤之间的关系已经被很多研究所揭示 。
• DKK-1对肿瘤的骨转移有促进作用 ，这与DKK-1能导致骨吸收 ，抑制骨形成的作用相一致 。
• 例如 ，虽然Dkk-1 的表达在乳腺癌中被发现下调 ，其他研究者也发现DKK-1 只在导致溶骨损伤的乳腺癌中产生[47] ；另外还有研究发现 ，乳腺癌细胞分泌出的DKK-1通过下调成骨细胞的分化和骨保护素(osteoprotegerin ，OPG)的表达从而抑制骨形成[48] 。
• 患骨肉瘤的患者的血清中有高水平的DKK-1 ，研究发现骨肉瘤细胞的条件培养基也能抑制骨生成 ，而且肿瘤的周边区域的细胞表达DKK-1最高 ，可能通过这种方式抑制创伤周围的骨生成 ，使骨肉瘤易于侵袭扩张[26] 。
• 类似的
，也有研究发现前列腺癌细胞既表达Wnt, 也表达Wnt通路的抑制物DKK-1[49]
，且分泌DKK-1发生在骨转移早期
，而在转移发生的过程中
，Dkk-1的表达下降[50]
。
【相关文献】
1. “Dickkopf-1 is a master regulator of joint remodeling”. D. Diarra et al., Nature medicine 2007 Feb;Vol 2 no 2
2. “Serum concentration of Dickkopf-1 protein are increased in patients with multiple myelomas and reduced after autologous stem cell transplantation”. M.C. Politou et al., Int. J. of Cancer 2006 Oct 1;119(7): 1728-31
3. “Mechanism of bone metastasis”. G.D Roodmann, N Engl J Med (2004); 350:1655-64
4. “WNT signalling in osteoblasts and bone disease”. J.J. Westerndorf et al., Gene (2004) 341;19-39
5. “A functional genomics approach for the identification of putative tumor suppressor gene. Dickkopf-1 as suppressor of Hela cell transformation”. A.M. Mikheev et al., Carcinogenesis (2004) pp47-59